Assim como no primeiro filme, Ben Stiller volta nessa sequência no papel do vigia de museu Larry Daley. Mas dessa vez a ação se dá no museu Smithsonian de Washington, na capital dos EUA, onde ganham vida personalidades da história americana - entre eles presidentes, Amelia Earhart (Amy Adams), uma das pioneiras da aviação; além de um improvável faraó, Kah Mun Rah (Hank Azaria).

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