Larry Daley (Ben Stiller) nunca consegue estabilidade em sua vida profissional, o que preocupa sua ex-mulher (Kim Raver). Afinal, o filho do casal, Nick (Bill Cobbs), não tem muitas referências paternas. No desespero, Larry assume o cargo de guarda-noturno no Museu de História Natural, em Nova York. Acidentalmente, ele toma contato com uma maldição na qual todos as figuras presentes no museu ganham vida, causando muitos problemas em seu turno.

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